Abstract:

摘  要：为研究灰裂腹鱼在人工养殖条件下的亲鱼培育、人工繁殖及鱼苗培育技术，2022年5月，选择体重500 g/尾以上、年龄4龄以上的灰裂腹鱼成鱼600尾，分别按90尾、210尾和300尾的数量放入面积为30 m²、80 m²和120 m²的流水池饲养，投喂蛋白质含量38%的沉性全价配合饲料，到2023年3月选择三批次培育亲鱼进行人工繁殖。成熟亲鱼采用人工采卵、授精、流水孵化。结果表明：蛋白质含量38%的配合饲料能够满足亲鱼营养需求。在水温为13.5～15.5 ℃时，受精率为78.4%，经162 h孵化，孵化率为67.2%，获初孵鱼苗97.2万尾。初孵鱼苗在混合营养期投喂红线虫，两周后投喂微粒鱼苗料，经60 d培育，获得全长2.3～3.5 cm鱼苗64.8万尾，鱼苗成活率66.7%。本研究丰富了灰裂腹鱼繁殖生物学资料，可为养殖户提供参考。

关键词：灰裂腹鱼；亲鱼培育；人工繁殖；苗种培育

灰裂腹鱼（Schizothorax griseus）属鲤科（Cyprinidae）裂腹鱼亚科（Schizothoracinae）裂腹鱼属（Schizothorax）裂尻鱼亚属（Racoma），又名细鳞鱼，属我国特有的高原鱼类，喜欢生活在暗河、急流之中，为冷水性底栖鱼类，主要分布于金沙江、乌江、澜沧江、龙川江、大盈江水系，在贵州分布于南盘江及乌江上游六冲河流域等^[1-3]。其肉质细嫩，味道鲜美，含肉率达71.22%，肌肉营养成分丰富，富含人体所必需的各种氨基酸和铁、锰、锌等多种矿物质，具有较高的营养价值。灰裂腹鱼对环境要求较高，生长慢、怀卵量低、胚胎发育时间长等原因导致其自然资源量较少。目前关于灰裂腹鱼的研究报道较少，仅见王思宇等^[4]研究评价了其肌肉营养成分，何勇等^[5]研究了其遗传多样性特征，笔者等^[6]对灰裂腹鱼亲鱼在人工繁殖后如何减少细菌性病害及提高亲鱼产后成活率作了技术性总结。本研究总结了灰裂腹鱼亲鱼的促熟方法，提高了受精率、孵化率，选择苗种培育开口饵料丰富了灰裂腹鱼繁殖生物学资料，可为养殖户提供参考。

1 材料与方法

1.1 亲鱼培育

2020年10月，从乌江上游六冲河流域七星河、盘大河、总溪河等河段收集灰裂腹鱼野生资源，经驯化，2022年5月，选择体重500 g/尾以上、年龄4龄以上的亲鱼进行培育。

亲鱼培育池为长方形，面积分别为1号池 30 m²、2号池80 m²和3号池120 m²，长宽比为（4~6）∶1，池深1.5 m，水深1.2 m，池水交换1～2 h/次，分别投放亲鱼90尾、210尾和300尾。养殖水源为地下涌泉水，水温10～17 ℃,溶解氧6 mg/L以上，pH值6.8～8.5。在产卵前1个月用水泵沿池面冲水，加大池水流动。

投喂沉性鱼用配合饲料，饲料粒径2.0 mm，蛋白质含量38%，日投喂量为鱼体重的4%～6%，早上8:00、中午1:00、下午6:00投喂，早晚投喂量占日投喂量的70%，中午占30%。每次投喂时间不低于20 min，早晚巡塘。

对照组为普通成鱼养殖池，面积50～200 m²，放养密度8～10尾/m²，执行常规养殖。

1.2 人工繁殖

1.2.1 成熟亲鱼雌雄鉴别  性成熟灰裂腹鱼在繁殖期雄鱼吻端“珠星”凸出、明显，体表鳞片粗糙，轻压腹部有乳白色精液流出；性成熟雌鱼在繁殖期腹部膨大、屯圆、有不规则斑点，生殖孔微红、略微外凸，卵巢轮廓不明显。

1.2.2 人工催产及授精  2023年3月15—19日，水温13.5～15.5 ℃时，分别从3个亲鱼培育池及普通成鱼养殖池中随机选择性成熟亲鱼使用促黄体生成素释放激素类似物（LHRH-A2）、鱼用绒毛膜促性腺激素（HCG）、马来酸地欧酮（DOM），按雌鱼每千克体重注射HCG 1 200 U +LRH-A₂ 20 μg + DOM 8 mg。雌鱼采用二次注射，第一次注射剂量为总剂量的1/3，第二次注射剂量为总剂量的2/3。针距时间为48 h。雄鱼在雌鱼第二次注射时同步一次注射，注射剂量为雌鱼总剂量的1/2。注射采用胸鳍基部胸腔注射法。将注射催产剂的亲鱼按雌雄2∶1的比例放入催产暂养池暂养，暂养池的水流速度加大到1～3 m/s，池顶加盖防逃网。按照以上方法，同时从普通成鱼养殖池中选择亲鱼开展人工催产对比试验。

距亲鱼第二次注射催产剂24 h后，需做好采卵授精准备。按雌雄亲鱼2∶1的数量采卵、采精后使用干法人工授精^[7]。同时根据卵粒数量及时加入稀释液10～30 mL^[8]，并继续摇动1～2 min后静置3～5 min，让其充分授精，用清水漂洗卵粒3～5次后转入流水孵化。

灰裂腹鱼卵为沉性微粘性卵，呈灰白色或浅黄色，吸水前卵径1.6～2.0 mm，授精2 h后吸水膨胀达到最大，为2.3～3.2 mm。

1.2.3 人工孵化  孵化用水经200目筛绢过滤，灰裂腹鱼受精卵人工孵化采用流水孵化箱盛卵，孵化箱规格为42 cm×35 cm×25 cm，每箱放入受精卵4万～6万粒，盖好遮阳盖板，调节水体流速至0.05～0.10 m/s。孵化期间及时去除发白卵或卵黄上带白点的死卵，使用3 mg/L高锰酸钾溶液浸卵20 min，1 d/次。水温13.5～15.5 ℃（平均 14.8 ℃）时，经162 h孵化后开始出膜。

受精率=（原肠中期存活授精卵数/孵化鱼卵总数）×100%；孵化率=（出膜鱼苗数/原肠中期存活受精卵数）×100%。

1.3 鱼苗培育

初孵鱼苗全长7～9 mm，出膜后1周在混合营养期投喂切碎的红线虫作为开口饵料，先用3%食盐水浸泡消毒10 min，经充分漂洗后切碎投喂。9～12 d时卵黄吸收完毕，能自主上浮，出膜2周时投喂微粒子鱼苗开口料，投喂时把饲料拌水后捏成块状。当鱼苗长到2 cm左右时，按每万尾每日投放20 g投喂斑点叉尾鮰鱼苗饲料进行饲养，每15 d抽测1次体长或体重，以便适时调整投饲量。

1.4 亲鱼催产率数据处理

亲鱼催产率的数据统计分析使用SPSS软件，试验结果平均催产率（%）用“x±s”表示。组间差异性比较用单因素方差分析后用非配对试验样本均数差异显著性检验（t检验）对结果进行比对，以P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著^[9]。

2  试验结果

2.1 亲鱼培育

用于培育的试验亲鱼在年龄上已达到性成熟年龄要求，通过近1年的培育，在2023年3月进行繁殖时，1号亲鱼池培育的雌性灰裂腹鱼亲鱼催产率不足70%，2号池、3号池培育的雌性灰裂腹鱼亲鱼催产率均在90%以上。对照组（普通成鱼 养殖池）培育的雌性灰裂腹鱼亲鱼催产率仅为 29.05%（表1）。所有雄鱼经注射一次催产剂均 可正常排精。

试验组的催产率显著高于对照组（P＜0.05）；2号池、3号池的催产率均显著高于1号池（P＜0.05）；2号池与3号池间差异不显著（P＞0.05）。

从163尾产卵亲鱼中随机抽测了15尾亲鱼，体长为28.5～39.3 cm，平均34.8 cm；体质量为592～1 283 g，平均985 g。绝对怀卵量为6 425~ 14 108粒，平均11 334粒/尾，相对怀卵量为84~ 141粒，平均125粒/g。

2.2 人工繁殖

3月18—22日试验组分3批次共催产灰裂腹鱼雌鱼187尾，产卵163尾，获卵粒184.7万粒。在水温13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃)时，受精卵经162 h孵化开始出膜，出膜持续时长34 h。在胚胎发育到原肠中期时抽测统计，最高受精率为82.6%，最低受精率为70.2%，平均受精率为 78.4%；在出膜完毕时抽测统计，最高孵化率为 71.3%，最低孵化率为58.1%，平均孵化率为67.2%。共孵出鱼苗97.2万尾（表2）。

2.3 鱼苗培育

灰裂腹鱼出膜期仔鱼全长7～9 mm，出膜后第1～2 d都是卧于孵化箱底部。出膜3 d后胚体平直，卵黄囊呈棒状，血液变红沿胚体一周循环。出膜后4～5 d时腰点出现（鳔形成），鱼苗常扎堆集中在孵化箱角落处，部分可间歇性跃起。出膜1周后鱼苗开始上孵，此时投喂切碎的红线虫作为开口饵料。出膜2周时改喂微粒子鱼苗开口料，当鱼苗长到2 cm左右时，按每万尾每日投放20 g斑点叉尾鮰鱼苗饲料进行饲养，随着鱼苗生长逐步加大投喂量。经过60 d培育，获得全长2.3~3.5 cm鱼苗64.8万尾，鱼苗培育成活率66.7%。

3  讨论

3.1 环境条件对亲鱼培育的影响

亲鱼培育质量是鱼类人工繁殖的关键，若越冬前投喂的饲料不能满足其性腺发育需要，在繁殖期就会常常出现亲鱼成熟不足或怀卵量明显减少的现象；若越冬后仍大量投喂脂肪含量高的饲料，则容易造成脂肪过多，导致不能正常产卵^[10]。野外环境下亲鱼总是自主去寻找最适宜于自身发育、索饵、越冬等的河流环境。使用流水池塘，溶解氧在6.5 mg/L以上，常年水温12～18 ℃，适合于昆明裂腹鱼的生长与发育^[11]。灰裂腹鱼人工养殖条件下，选用常年水温10～17 ℃的水环境，虽然与天然环境相比缺少了夏季的高温期与冬季的低温期，缺少了急流、险滩等天然环境，但培育能取得成功说明选择环境恰当，且试验组3个亲鱼培育池培育的亲鱼催产率明显高于对照组。通过对比人工催产成熟亲鱼的产卵情况发现，1号池培育的亲鱼催产率明显低于2号池和3号池。3个亲鱼培育池选用的培育亲鱼、水源、流速、饲料、放养密度等基本一致，但1号池仅30 m²，而2号池为80 m²，3号池为120 m²，这说明亲鱼培育池过小不利于亲鱼培育。研究发现，适合灰裂腹鱼亲鱼培育的鱼池面积应在50 m²以上、水深1.2 m以上。在产卵前模仿野生环境用加大冲水刺激性腺发育，提高繁殖效率，这与陈礼强^[12]研究细鳞裂腹鱼人工繁殖时加快性腺发育的方法基本一致。

试验组亲鱼培育养殖密度为2.5～3.0尾/m²，明显低于对照组8～10尾/m²的养殖密度。此外，试验组亲鱼培育池池水交换率较高，在产卵前1个月每2 d用水泵抽水沿池面冲水1次，加大池水流动，促进了亲鱼性腺发育，更有助于卵的成熟。

3.2 促进灰裂腹鱼人工繁殖的环境因素

鱼类促性腺激素（GTH）的分泌受促性腺激素释放激素（GnRH）和多巴胺（DA）的双重调节，GnRH能促进GTH的释放诱导排卵，而DA对GTH则是抑制作用^[13-14]。注射外源性激素可诱导鱼类排卵，但要使其顺利产卵，常常还需要适宜的外部环境因素，如大流速的水流、合适的水温等。试验采用外源性激素（HCG和LRH-A₂）和DA的拮抗物马来酸地欧酮（DOM）三种特质按雌鱼每千克体重注射HCG 1 200 U +LRH-A₂ 20 μg +DOM 8 mg 剂量，取得了较好的催产效果。灰裂腹鱼在注射催产素后因体内短时间激素水平升高，雌雄亲鱼均表现出异常兴奋，一是有相互追逐现象，二是特别爱跳跃，因此要加盖防逃网，勤观察、勤检查，防止亲鱼跳出催产暂养池造成损失。

人工授精时有效地延长精子成活时间及剧烈运动时间对提高受精率有极大促进作用，0.8%NaCl溶液激活四川裂腹鱼的精子让其受 精率大幅度提高^[15]，参照DB42/T 1857—2022 《齐口裂腹鱼人工繁殖技术规范》^[8]，在灰裂腹鱼人工繁殖时使用0.45%的生理盐水激活液激活精子，其平均受精率达到78.4%。在孵化水温为13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃)时，灰裂腹鱼受精卵孵化所需时间为162 h。与同期繁殖的昆明裂腹鱼168 h^[11]、四川裂腹鱼158 h^[16]相当。长时间的孵化会造成工作量增加，也会给各种病害的发生带来更多机会。孵化期的水温、死卵为水霉菌的繁殖带来了有利时机。为防止死卵着生水霉感染正常发育的受精卵，采用以下方法：一是及时去除死卵防止水霉病，但该方法工作量较大；二是孵化期间使用3 mg/L高锰酸钾溶液浸卵20 min，1 d/次。

3.3 胚胎发育

胚胎发育结果显示，在水温13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃)的情况下，灰裂腹鱼卵在孵化4 h后出现卵裂沟，开始进入细胞分裂期。大部分未受精的卵也能正常完成细胞分裂，部分受精卵及未受精的卵主要死亡时期在囊胚阶段，即受精后的第2天。原肠期可作为灰裂腹鱼胚胎发育拐点，胚胎发育顺利通过原肠中期后便很少死亡，大部分可正常发育到鱼苗孵出。灰裂腹鱼胚胎发育较为同步，从受精到孵出历时162 h，积温2 400 ℃·h。

胚胎发育具有种的特异性，主要是种的遗传因素来决定，受精卵的发育速率受环境因子影响较大^[17]。灰裂腹鱼的卵呈圆球形，灰白色或浅黄色，为沉性卵，微粘性，初孵仔鱼全长7～9 mm，心跳剧烈，血液循环明显。在水温13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃)的情况下孵化历时162 h出苗，这与同科同属的拉萨裂腹鱼^[18]胚胎发育所需时间相差较大。

3.4 仔稚幼鱼期鱼苗培育

灰裂腹鱼初孵仔鱼全长7～9 mm，全身透明，体视显微镜下可见此时心脏跳动频率达到150 次/min左右，血液仅在心脏部位和尾部为红色，其余部位无色。初孵仔鱼第1～2 d都是卧于孵化 箱底部。出膜3 d后胚体平直，全身血液变红。出膜4～5 d后鱼鳔开始形成，部分可间歇性跃起，体表色素开始出现，各鳍呈透明状，无鳍条，营养来源全部依靠卵黄囊。出膜1周后鱼苗开始上孵，此时肠道通畅，下颌、鳃盖可正常开合，鳃丝变红，卵黄囊吸收基本完成，鱼苗处于混合营养期，投喂切碎的红线虫作为开口饵料。仔鱼的开口时间、饵料的适口性、营养性及投喂方法，是影响仔鱼成活和生长的关键技术^[19]。红线虫作为大多数鱼类的开口饵料，其营养丰富、全面，且适口性好，经切断后未被鱼苗吃下的还能成活，不易污染水质。出膜2周时鱼苗各器官已形成，改喂微粒子鱼苗开口料，当鱼苗长到2 cm左右时，按每万尾每日投放20 g斑点叉尾鮰鱼苗饲料进行饲养，后期随着鱼苗生长逐步加大投喂量。
4  结语

本研究从亲鱼培育、雌雄鉴别、采卵授精及人工孵化、苗种培育等方面详细介绍了灰裂腹鱼人工繁殖的技术要求，投喂蛋白质含量38%全价配合饲料可以满足灰裂腹鱼亲鱼的营养需求，成熟灰裂腹鱼的绝对怀卵量为6 425～14 108粒（平均11 334粒/尾），相对怀卵量为84～141粒（平均 125粒/g）；受精卵在孵化水温为13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃)时，经历162 h孵化开始出膜，所需积温2 400 ℃·h，初孵鱼苗全长7～9 mm， 使用红线虫作为开口饵料，经2次转食，培育60 d后全长可达2.3～3.5 cm。